一、羧酸的检验

羧酸的酸性可直接由溶解度实验和指示剂实验来检出，对直接不易检出的羧酸也可根据羧酸酸性强弱的不同，采用碘酸钾-碘化钾溶液来鉴定。此外，测定羧酸的中和量可先使羧酸转变为衍生物后，用羟肟酸铁实验来进行间接检验。

（一）碘酸钾-碘化钾实验

羧酸与碘酸钾-碘化钾溶液混合后，温热能析出碘，碘遇淀粉溶液则呈蓝色。

方法　取5mg试样（或2滴其在中性乙醇中的饱和溶液）置于小试管中，加入2滴2％ KI溶液及2滴4％ KIO ₃ 溶液。塞好试管，置沸水浴中加热1min，冷却，加入1～4滴0.1％淀粉溶液。若样品为酸性，则呈现蓝色。

在某些情况下需要多加一些淀粉溶液方能出现碘-淀粉复合物的特征蓝色。

固体试样可取数毫克与数毫克干燥的KI及KIO ₃ 共同研细。若有碘的棕色出现即表明正性结果。如果对判断发生怀疑，可在混合物中加入5滴水及2～4滴淀粉溶液再进行观察。

（二）中和量的测定

羧酸能被标准的氢氧化钾溶液中和，据此可以求出羧酸的中和量。中和量是指每摩尔OH-可以中和羧酸的克数。

一种羧酸的中和量乘上羧酸分子中羧基的数目，其乘积即为该羧酸的分子量。

方法　准确称取试样0.2000g，置于250mL的锥形瓶中，加水或水与乙醇的混合溶液20mL，使试样溶解，加2滴酚酞作指示剂。再用0.1mol/L的氢氧化钾标准溶液滴定至终点。

测定完后，按下列公式计算羧酸试样的中和量。

式中， m 为试样的质量，g； C 为氢氧化钾物质的量浓度，mol/L； V 为滴定时用去氢氧化钾标准溶液的体积，mL。

一般的羟基，不影响中和量的测定，例如水杨酸的中和量，等于它的分子量。而脂肪族 α -氨基酸不能用本法来测定其中和量。

几种典型羧酸的中和量和分子量的关系如表3-2所示。

不溶于水及乙醇的羧酸，称量后可以先加入定量的过量氢氧化钾标准溶液，加热煮沸，冷却后，再用标准酸溶液来滴定过量的碱。

（三）羟肟酸铁实验

羧酸不能直接与羟胺作用，需将羧酸转变为酰氯后再转变为酯，后者与羟胺作用形成羟肟酸。羟肟酸与三氯化铁在弱酸性溶液中形成有颜色的可溶性羟肟酸铁。大多数这样的铁盐呈现紫红色，但通常也呈深蓝色，尤其当浓度很大时更是如此。反应如下：

方法　放100mg（或4～5滴）试样于一中型试管中，加入6滴氯化亚砜。将试管浸入沸水浴中加热，使混合物沸煮2min。再加入1mL正丁醇，再沸煮1min。若有沉淀出现，再逐滴加入丁醇，并继续加热直到沉淀溶解为止。将试管冷却，加入1mL水使过量的氯化亚砜水解，加入1mL 1mol/L盐酸羟胺溶液，然后加入足够量的5mol/L氢氧化钾溶于80％乙醇的溶液，使混合物对石蕊试纸呈碱性反应。将混合物加热至沸，再冷却。以稀盐酸将所得反应混合物酸化，然后逐滴加入10％三氯化铁溶液，若有紫红色或紫红色出现，即表明正性结果。

注意事项　通常加1或2滴三氯化铁溶液即足以出现羟肟酸铁盐的颜色。然而，在某些情况下加入的量需要多一些，直到加入的量已超过1mL尚不显色时方可算负性结果。如果有大量酯存在，加入三氯化铁后呈现红棕色。这样的混合物如果用水稀释，一般能显现特征的紫红色。

所有酰卤、酸酐和酯类对本实验都能给出正性结果。这些化合物可以借元素分析（如酰卤含有卤素）、溶解行为（这些化合物均属中性）等实验与羧酸区别开来。

氯化亚砜与二元羧酸作用形成酸酐而不是酰氯，尤其如HOOC（CH ₂ ） _n COOH，当 n 是2或3时则形成酸酐，当 n 等于4或5时则形成环状酮类。二氯乙酸及三氯乙酸以及氨基酸与氯化亚砜作用不形成酰氯， α -羟基酸与氯化亚砜作用产生甲酸及一个醛或酮， α ， β -不饱和酸遇氯化亚砜，与析出的氯化氢发生加成反应形成 β -氯代酸。

将羧酸转变为酯的另一方法是：溶解或悬浮20～25mg试样于0.5mL乙二醇中。加入1滴浓硫酸，缓和回流加热2min。冷却，进行上述羟肟酸实验。

二、酰卤的检验

酰卤含有活泼的卤素。低分子量的酰卤遇水易水解，溶液呈酸性反应，遇碱溶液水解更快。酰卤能借羟肟酸铁实验检出，也可借下述实验检验。

苄胺实验　酰卤与苄胺反应产生不溶于水的酰苄胺沉淀。

方法　在小型试管中盛3滴苄胺，加入2滴试样。当反应缓和后，加入2mL冷水，并极力摇荡试管，产生的白色沉淀可自水中重结晶，测定其熔点。

三、酯的检验

鉴定酯的最好方法是羟肟酸铁实验。

四、酸酐的检验

大多数酸酐可以直接转化为羟肟酸而进行检验，无需先将它们转变为酯：

方法　将1滴酸酐加到0.5mL 1mol/L盐酸羟胺的甲醇溶液中。将混合物加热至刚好沸腾，冷却，加入1滴10％三氯化铁溶液。有羟肟酸铁络合物的特征颜色（蓝红色）出现时，表明正性结果。

若事先推测试样可能是一个酸酐，但按上述操作给出负性结果时，那么将3滴试样与3滴丁醇共热，然后按酯类进行检验。

五、酰胺的检验

（一）羟肟酸铁实验

凡在氮原子上没有取代基的酰胺，均可借羟肟酸铁实验来检验。当然，必须事先知道试样中不再含有其他能起羟肟酸盐反应的官能团。

方法　将20～25mg试样加到1mol/L羟胺盐酸盐在1，2-丙二醇（Propylene Glycol）的溶液中。煮沸加热2min，冷却，加入0.5～1mL5％三氯化铁溶液，如有红到紫色显现，表明正性结果。

（二）区别芳香酰胺与脂肪酰胺的实验

大多数芳香酰胺能借过氧化氢处理直接转变为羟肟酸，而脂肪酰胺则不行。大多数脂肪酰胺与羟胺的水或醇溶液作用能转变为羟肟酸，而芳香酰胺在同样实验条件下的反应则要缓慢得多：

方法

①脂肪酰胺的检验　将40～50mg酰胺加到1mL 1mol/L羟胺盐酸盐的乙醇溶液中，将混合物沸煮3min。冷却，加入1～2滴5％三氯化铁溶液，有蓝红色显现则表明正性结果。

②芳香酰胺的检验　悬浮40～50mg试样于2～3mL水中，塞好试管并且将它极力摇震数秒钟。加入4～5滴6％过氧化氢溶液，将混合物加热接近沸腾。如果酰胺尚未完全溶解，再多加数滴过氧化氢溶液。冷却，加入1滴5％三氯化铁溶液。如果在1min之内尚无蓝红色显现，需将试管加以温热，但不使溶液沸腾。在大多数情况下，反应往往经过羟肟酸盐阶段，出现棕色，逐渐析出棕色沉淀。

在上述实验最后所得到的混合物中加入数毫升10％氢氧化钠溶液，可得到澄清的深红棕色沉淀。

（三）酰胺水解实验

N-取代的或未取代的酰胺，也可以借水解生成胺及羧酸的方法加以鉴定。

（四）脲、取代脲及硫脲实验

脲与取代脲在性质上近似于酰胺。当脲、N-取代脲或N，N'-二取代脲与过量苯肼在200℃时加热时，得到均二苯氨基脲（Diphenyl Carbazide），并析出氨或胺。例如：

硫脲则生成二苯氨基硫脲。均二苯氨基脲或均二苯氨基硫脲与镍离子反应形成紫色螯合物，此产物能溶于氯仿。

方法　将20～25mg试样置于一中型试管中，加入2～3滴苯肼，将混合物置油浴中于195℃加热5min。冷却，加入6滴浓氢氧化铵及6滴10％硫酸镍溶液。极力摇荡试管，静置3min。用10滴氯仿萃取混合物。若氯仿层显红紫或紫色，表明正性结果。

注意事项　在反应温度下，部分脲转变为缩二脲。不过缩二脲也与苯肼反应产生均二苯氨基脲。许多氨基甲酸酯用这个方法检验，也得正性结果。这个实验的灵敏度，在用于检出脲时比用于检出硫脲时更高。硫脲的存在，可借在200℃时加热干燥样品使生出H ₂ S的办法来检出。